Набор для непрямого обнаружения антител к ELISA для вируса чумы свиней Indirect ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody
Инструкция по эксплуатации
[Введение]
Набор изготовлен из пластины, покрывающей антиген, пластины, разбавленной сывороткой, ферментативного диантама и других реагентов. Метод непрямого ELISA используется для обнаружения специфических антител к чуме свиней, присутствующих в сыворотке свиней, чтобы оценить иммунный эффект вакцины против чумы свиней.
[Использование]
Подходит для постиммунологической оценки вакцины против чумы свиней и серологической диагностики неиммунизированных свиней.
[Принцип]
Набор покрывают микропланшетом с использованием смешанного антигена, состоящего из двух основных специфических антигенов вируса чумы свиней. В тесте, если образец сыворотки содержит соответствующее антитело, он связывается с антигеном на тестируемой пластине с образованием комплекса антиген-антитело. Добавленный впоследствии фермент-двухабан специфически связывается с комплексом антигенных антител на пластине детектирования, и раствор субстрата TMB может образовывать синий продукт. После прекращения реакции цветопередачи она была желтой, и результаты были наконец получены путем измерения поглощения при длине волны 450 нм.
[Основные ингредиенты набора]
1
Антиген-покрывная пластина
2 блока 96 отверстий/блок
2
Отрицательная контрольная сыворотка
1 труба 50 мкл/труба
3
Положительная контрольная сыворотка
1 труба 50 мкл/труба
4
Ферментативный двухстойкий
2 трубки 0.2 мл/труба
5
25-кратный концентрат для промывки
1 бутылка 25 мл/бутылка
6
Раствор субстрата A
1 бутылка 10ml/бутылка
7
Раствор субстрата B
1 бутылка 10ml/бутылка
8
Жидкость для прекращения
1 бутылка 10ml/бутылка
9
Образец разбавителя
2 бутылки 30 мл/бутылка
10
Пластина для разбавления сыворотки
2 блока 96 отверстий/блок
11
Инструкция по эксплуатации
1 лист
[Подготовка образцов]
Взяли цельную кровь животных и приготовили сыворотку в соответствии с обычными методами. Сыворотка была прозрачной и без гемолиза.
[Реактив]
Перед использованием различные реагенты в наборе, кроме фермента, должны быть восстановлены до комнатной температуры (около 25 ° С). 25-кратный концентрированный промывочный раствор восстанавливается до комнатной температуры или слегка нагревается после встряхивания, чтобы растворить осажденную соль, а затем 25-кратное разбавление деионизированной водой. 8 ° C может храниться 7 дней. Перед использованием фермент-диан разбавляют в 1:100 раз с разведением образца и теперь используют.
[Разбавление образца]
Как стандартные образцы, так и образцы, подлежащие тесту, были разбавлены в 1:50 объемах в таблетках для разведения сыворотки (рекомендуемый метод разведения: 245 мкл в разбавлении образца 5 мкл
Образцы сыворотки, подлежащие тесту).
[Шаг операции]
1. Возьмите антиген-покрывающую пластину, сначала добавьте 50 мкл разбавителя образца, затем добавьте разбавленный образец и контрольный образец по 50 мкл каждый в отверстие в антиген-покрывающую пластину и осторожно продувайте пипеткой. Отрицательный контроль и положительный контроль имели по 2 отверстия и оставляли на 37 °C для инкубации в течение 30 минут.
2. Снимите раствор с доски, добавьте 200 мкл разбавленной моющей жидкости на каждое отверстие, оставьте на 1 минуту и вылейте ее, а затем высушите на впитывающей бумаге и промойте 3 раза.
3. Добавьте разбавленный фермент в каждую лунку, двухзначный анти-100 мкл, и поместите на 37 °C для инкубации в течение 30 минут.
4. Снимите раствор с доски, добавьте 200 мкл разбавленной моющей жидкости на каждое отверстие, оставьте на 1 минуту и вылейте ее, а затем высушите на впитывающей бумаге и промойте 3 раза.
5. К каждой лунке добавляли равный объем смешанного раствора субстрата A и раствора субстрата B 100 мкл, чтобы защитить цвет от света в течение 10 минут.
6. Каждую лунку добавляли 50 мкл раствора для прекращения, и поглощение длины волны 450 нм измеряли в течение 10 минут.
[Результат]
В уведомлении Министерства сельского хозяйства о выпуске «Национального плана обязательной иммунизации против болезней животных 2013 года» четко указывалось, что антитела к чуме свиней имеют положительный валентный титр антител к непрямым экспериментам по свертыванию крови ≥ 25. На основе этого уведомления формулируются критерии определения результатов:
1 Результаты эксперимента соответствуют следующим условиям одновременно:
Стандартные положительные контрольные поры в среднем OD450 нм ≥ 0,6 ± 0,02.
Среднее значение пор стандартного отрицательного контроля OD450 нм ≤ 0,3 ± 0,02.
2 Определение результатов теста на уровень антител после иммунизации вакцины:
Образцы OD450 нм ≤ 0,3 были оценены как отрицательные антитела к чуме свиней.
Образец OD450 нм> 0,3 был оценен как положительный на антитела к чуме свиней.
Образец OD450 нм находится в диапазоне пороговых значений 0,3 ± 0,02, и рекомендуется повторное тестирование для обеспечения точных результатов.
3 Определение результатов теста на иммунную защиту вируса чумы свиней:
Образец OD450 нм ≤ 0,3, был оценен как не защищенный, а образец не защищен от вирусной инфекции чумы свиней.
Образец OD450 нм находится между 0,3 и 0,6, что, как было установлено, является низкой защитной силой, а уровень антител в образце является низким, что обеспечивает определенную защиту от эпидемического штамма.
Образец OD450 нм ≥ 0,6, который был оценен как защищенный, и уровень антител в тестируемом образце был высоким, что может обеспечить более 90% устойчивости в тесте на отравление.
Образец OD450 нм находится в двух предельном диапазоне 0,3 ± 0,02 или 0,6 ± 0,02, и рекомендуется повторное тестирование для обеспечения точных результатов.
[Примечание]
1 Слишком высокий фон может привести к тому, что общий уровень результатов будет высоким. Экспериментальный процесс должен обеспечить чистоту или добавление пустого контроля в эксперимент.
2 Температура окружающей среды ниже 15 ° C может привести к низкому общему уровню результатов. Экспериментальный процесс должен обеспечить, чтобы температура окружающей среды была как можно ближе к 25 ° C или чтобы время цветопередачи субстрата было соответствующим образом увеличено.
3 Не подвергайте воздействию сильного света субстрата A и субстрата B и избегайте контакта с окислителями.
4 Концентрированный промывочный раствор разбавляют деионизированной водой. Если кристаллы обнаружены, его следует нагревать на водяной бане, чтобы растворить.
5 Фермент-фермент должен быть теперь составен.
6 4 °C для инкубации образца в течение ночи и фермента бендбан могут быть получены лучшие результаты.
Научно совместимые антигены высоки, и каждая вакцина содержит не менее 300 000RID, ослабленных ядов кроликов чумы свиней, не менее 7, 0 X108CFU штамма P. suis GC42, а также не менее 3, 0 X108CFU.
Мне нужно проконсультироваться.
Во время просмотра наших продуктов, есть ли что-нибудь, что вас особенно устраивает или что-то еще нужно сделать? Ваши консультации или предложения напрямую помогут нам улучшить качество наших продуктов и услуг и принесут вам более интимный опыт. Я
* Пожалуйста, заполните поле выше (поле * номер является обязательным), и мы ответим на ваш отзыв как можно скорее.
渝公网安备50022602000038号